Procédure opératoire de fonctionnement et d'utilisation d’un STRATUS
Procédure PF4A1

I - Mise en route des différents éléments constituant l'appareillage

A - Principe général de fonctionnement

Avec l'analyseur STRATUS, on peut déterminer la quantité d'antigènes particuliers chez un patient, par la compétition d'antigènes marqués à une enzyme (conjugué) vis à vis d'anticorps immobilisés dans une immunomatrice (fibres de verre revêtues incorporées dans une tablette spécifique) servant de support à la réaction et à la lecture. Après avoir terminé la réaction de fixation, on ajoute à la matrice une solution de lavage qui contient le substrat de l'enzyme pour éluer l'excès de conjugué et pour produire une réaction fluorescente dont l'intensité est proportionnelle à la concentration fixée de l'antigène marqué. La longueur d'onde d'excitation de la réaction produite est à 360nm et la longueur d'onde d'émission à 450nm. Les résultats sont calculés d'après des mesures en cinétique d'estimation de production de la lumière fluorescente à une longueur d'onde de 450nm.

B - Appareillage :

* Automate : STRATUS : système multiparamètrique d'immunoanalyse (dosage par

immunofluorescence)

* Diluteur STRATUS : à proximité de l'automate.

L'automate est sous tension en permanence (bouton on/off derrière la porte avant gauche).

La documentation technique relative à l'appareillage est disponible dans l'armoire métallique située dans la même pièce.

II - Opérations préliminaires

A - Vérifications systématiques

* Toutes les semaines imprimer les valeurs des paramètres :

- Sur le clavier, taper (CLR) (1) (6) (5) (ENT).

- Comparer les valeurs obtenues avec les valeurs de référence et leurs écarts autorisés

inscrits à l'intérieur de la porte avant gauche.

* Contrôler le niveau d'eau distillée dans les réservoirs au-dessus de la paillasse.

* Remplacer si besoin le rouleau de papier (réserve dans le placard sous l'automate)

 

 

B- Nettoyage

* Utiliser de l'eau distillée ou de l'eau de Javel à 5%.

* Eléments à nettoyer : les 3 sondes (prélèvement - distributeur du conjugué - distributeur du

substrat).

* Mode opératoire :

Remplir les flacons étiquetés "eau distillée" et les placer dans les logements prévus normalement

pour les flacons de substrat et de conjugué (voir schéma du constructeur)

- Sur le clavier, taper : (CLR) (1) (6) (3)

- L'écran affiche : RINSE PUMPS TIPS ?

- Sur le clavier, taper : (YES)

Ce nettoyage des sondes à l'eau distillée est obligatoire avant et après chaque dosage ou série de

dosages.

* Cas particuliers : fin de journée ou calibrage :

Effectuer un rinçage à l'eau distillée comme précédemment décrit, puis un rinçage avec de l'eau de Javel à 5% :

- Prendre les flacons étiquetés "eau de Javel", les remplir de Javel récemment préparée et

les placer dans les logements normalement prévus pour les flacons de substrat et de

conjugué (voir schéma du constructeur) ; placer une cupule également remplie de Javel

en position 30 du caroussel.

- Sur le clavier, taper : (CLR) (1) (6) (1)

- L'écran affiche : WASH TIPS ?

- Sur le clavier, taper : (YES)

- Terminer obligatoirement par un deuxième rinçage à l'eau distillée.

III - Préparation à l'utilisation de l'appareillage

A - Liste des tests disponibles et numéros de code correspondants

* TSH us : test n° 20

* T4L : test n° 22

* DIGOXINE : test n° 1

* FERRITINE : test n° 18

* CKMB : test n° 24

B - Réactifs utilisés :

Dans chaque coffret de réactif on trouve :

* une gamme de calibrage prête à l'emploi, sauf pour les CKMB,

* 4 boites de 30 tablettes spécifiques de l'analyse,

* 2 flacons de substrat prêt à l'emploi,

* 1 flacon de conjugué prêt à l'emploi,

* + 1 diluent tampon dans les coffrets de T4L et CKMB.

Les coffrets de réactifs sont stockés dans le réfrigérateur à la paillasse.

 

C- Technique de reconstitution.

La gamme de calibrage n'est à reconstituer que pour les CKMB avec le tampon du coffret. Utiliser une pipette jaugée en verre et reconstituer les 6 flacons de calibrage avec 2ml de tampon. La stabilité après reconstitution est de 60 jours à +4°C/+8°C.

D - Consommables

* Cupules échantillon en plastique de 500 µl,

* Rouleau de papier imprimante.

E - Positionnement des réactifs

* Les flacons de conjugué et de substrat spécifiques du paramètre à doser sont à placer dans

leurs logements respectifs comme indiqué sur le schéma du constructeur

* Tablettes spécifiques du paramètre à doser :

- ouvrir la porte avant droite,

- vider la poubelle contenant les tablettes usagées conformément à la procédure PO6

relative à l'élimination des déchets contaminés,

- abaisser le ressort du chargeur,

- insérer le nombre de tablettes spécifiques correspondant au nombre de dosages à

effectuer.

IV - Exécution des analyses

A - Sélection de l'analyse

Choisir le numéro du test désiré (se reporter au chapitre IV-D : analyse des spécimens).

B - Calibrage

1) Fréquence

Le calibrage est obligatoire :

- à chaque changement de lot de réactif,

- après chaque maintenance,

- en cas de dérive avérée des contrôles de qualité interne.

2) Echantillons de calibrage

- 6 points de gamme prêts à l'emploi pour DIGOXINE, TSH us, FERRITINE et T4L,

- 6 points de gamme à reconstituer pour les CKMB (voir ch.III-B et C)

- Péremption indiquée par le fabricant sur le coffret

3) Mode opératoire

 

 

 

 

 

a) DIGOXINE, TSH us et FERRITINE :

- Pipeter 200µl de chaque point de gamme dans 2 cupules échantillons,

- Placer ainsi chaque point de calibrage en double sur le carrousel (positions 1 à 12),

- Placer à la suite les 2 (DIGOXINE) ou 3 (autres paramètres) échantillons de Controle,

- Sur le clavier, taper: (CLR) (1) (4) (0) (n° du test) (ENT). Les n° de code des tests

disponibles sur le STRATUS sont indiqués au chapitre III-A,

b) T4L:

Les échantillons de Calibrage, de Controle et les dosages nécessitent une prédilution au 1/21

effectuée sur le Diluteur STRATUS:

- Allumer le Diluteur en pressant le bouton POWER,

- Attendre l'affichage: STRATUS,

- Sur le clavier du Diluteur, taper: (PRIME DILUTOR),

- Attendre l'affichage: STRATUS,

- Mettre en place le flacon de DILUENT, les 6 flacons de Calibrage, les 3 points de

Contrôle de Qualité Interne et le carrousel Stratus avec le nombre de cupules adéquat

- Sur le clavier du Diluteur, taper: (2) (2) (CAL.),

- Attendre l'affichage: FREE T4 22.,

- Sur le clavier du Diluteur, taper: (START/CONTINUE),

- Quand les dilutions sont terminées transférer le carrousel sur l'automate STRATUS.

c) CKMB

Avant le calibrage, vérifier le paramétrage :

- Sur le clavier du STRATUS, taper : (CLR) (2) (0) (0) (ENT)

- Les valeurs du paramétrage s'impriment : vérifier qu'elles sont identiques à celles de la notice à l'intérieur du coffret (22 codes à vérifier)

- En cas de discordance, utiliser le clavier numérique pour modifier les valeurs du

paramétrage conformément à la notice : taper (la bonne valeur) puis, (ENT) pour passer

aux valeurs suivantes

- Puis, procéder pour le calibrage comme indiqué au paragraphe a) (DIGOXINE, TSH us

et FERRITINE).

4) Résultats

L'analyseur accepte ou non le calibrage. En cas de rejet, recommencer en ayant vérifié l'absence

d'interversion notamment, ou toute autre erreur de manipulation.

Les bandes de résultats sont conservées dans le classeur des calibrages, rangé dans l'armoire

métallique.

 

 

 

 

 

 

 

C - Contrôles de qualité interne

1) Nature

Produits lyophilisés préparés à partir de sang humain :

* Immunocontrôles Dade (levels) : 3 niveaux de concentration pour TSH us, T4L et

FERRITINE,

* Immunocontrôles CKMB : 3 niveaux de concentration,

* Asqualab pour DIGOXINE : 2 niveaux de concentration.

2) Lieu de stockage

Tous les contrôles sont stockés dans le réfrigérateur de la paillasse, les dates de péremption étant

indiquées sur les boites.

Après reconstitution et répartition en aliquotes de 200 µl, les conserver dans le congélateur de la

pièce "sida" au maximum pendant 30 jours.

3) Reconstitution

a) Immunocontrôles Dade (levels) et Asqualab :

- Taper doucement sur le flacon pour libérer le lyophilisat,

- Ouvrir doucement le bouchon de caoutchouc,

- Utiliser une pipette à 2 traits pour ajouter 5 ml d'eau distillée,

- Reboucher le flacon avec le bouchon de caoutchouc,

- Laisser reposer 10 mn à température ambiante puis agiter doucement pour mélanger par

retournements de façon intermittente jusqu'à dissolution complète,

- Bien agiter, mais doucement, juste avant utilisation.

b) Immunocontrôles CKMB :

- Sortir du réfrigérateur et laisser revenir à la température ambiante pendant 10 mn,

- Ouvrir doucement le bouchon de caoutchouc,

- Utiliser une pipette à 2 traits pour ajouter 3 ml d'eau distillée,

- Reboucher le flacon avec le bouchon de caoutchouc,

- Laisser reposer 15 mn à température ambiante puis agiter doucement pour mélanger par

retournements jusqu'à dissolution complète.

4) Utilisation des contrôles

- Systématiquement à la suite des échantillons de calibrage (positions 13-14 ou 13-14-15

du carrousel),

- Avant chaque série de dosage (positions 1-2 ou 1-2-3 du carrousel),

 

 

 

 

5) Résultats

Les valeurs cibles des différents contrôles de qualité interne et leurs écarts tolérés sont mentionnés

au début des classeurs des différents paramètres.

En cas de valeurs érronées :

- Recalibrer le paramètre en cause,

- Si l'erreur de mesure persiste, en rechercher la cause et mettre en place la mesure

corrective.

D - Analyse des spécimens

1) Nature et identification :

- Travailler de préférence sur sérum, à défaut sur plasma hépariné,

- Identifier les aliquotes des sérums à partir des tubes primaires (voir la procédure de conduite des analyses PF6, Prélèvements I - C).

2) Préparation du carrousel :

- Penser à positionner les contrôles de qualité interne,

- Numéroter à la suite et à partir des feuilles de paillasse les sérums des patients,

- Distribuer 200 µl de sérum dans les cupules correspondantes sur le carrousel (nunéros 1

à 30),

- Placer le carrousel sur l'appareil en veillant à mettre la cupule n°1 en regard de la flèche

de repérage.

3) Programmation des analyses

- Sur le clavier du STRATUS, taper : (CLR) (N° du test) (ENT),

- L'écran affiche : STORE CTRL ?

- Sur le clavier du STRATUS, taper : (NO)

- L'écran affiche : READY TO START ?

- Sur le clavier du STRATUS, taper : (YES)

- La série d'analyses démarre.

4) Résultats

Les résultats s'impriment sur papier au fur et à mesure par numéro de cupule :

- Reporter sur la bande le numéro du dossier de chaque patient en face du numéro de la

cupule correspondante,

- Après validation analytique (voir PF6, IV - B), saisir les résultats numériques

sur l'informatique Gespower,

- Conserver les bandes dans deux types de cahier :

. un pour les bilans thyroïdiens,

. un pour les autres paramètres.

- Ranger les cahiers dans l'armoire métallique.

 

 

V - Fin de travail

A la fin des séries de dosage, l'écran affiche : STRATUS :

- Reboucher soigneusement les réactifs et les ranger dans le réfrigérateur,

- Jeter les cupules dans les conteneurs SHARPSAFE jaunes pour élimination des produits

contaminés selon la procédure PO6,

- Rincer l'appareil à l'eau distillée (voir Opérations préliminaires II - B),

- Conserver les sérums des patients dans le réfrigérateur de la paillasse pendant 4 jours,

puis les jeter dans les conteneurs SHARPSAFE jaunes.