Procédure PF6Aq21

A.) Nature et identification

- Prélever sur tube sec (sérum)

- L'identification des tubes primaires est effectuée dans les services au moment du prélèvement

par le personnel infirmier. Des étiquettes sont éditées au laboratoire à l'enregistrement des

demandes d'examen pour permettre de reproduire l'identité des patients sur les aliquotes (tubes

secondaires).

B) Recueil : De préférence, prélever le patient à jeun.

C) Etapes préanalytiques

1) Centrifugation : Centrifuger les tubes primaires dans la centrifugeuse de la pièce de réception

pendant 15 minutes à 4 000 trs/minute.

2) Préparation des aliquotes

Aliquoter systèmatiquement les tubes primaires :

- Prendre des tubes à hémolyse de 5 ml en polypropylène

- Coller sur les tubes les étiquettes d'identification du patient précédemment éditées.

- Transférer le sérum du tube primaire dans le tube en polypropylène lui correspondant.

- Boucher l'aliquote

- Effectuer cette opération patient après patient pour éviter tout risque d'erreur d'identification

- Jeter les tubes primaires dans le conteneur SHARPSAFE jaune pour déchets contaminés

de la pièce de réception.

- Stocker les aliquotes jusqu'à réalisation des analyses dans le congélateur de la pièce SIDA.

D) Etapes analytiques

Se reporter au chapitre IV Protocole opératoire de la présente procédure

E) Etapes postanalytiques

Conserver les sérums après analyse dans le réfrigérateur à la paillasse pendant une semaine puis les jeter dans le conteneur SHARPSAFE jaune de la paillasse.

Conserver un aliquote sérique en sérothèque à -42°C pendant 1 an au minimum (obligation légale)

II - Calibrage

A) Nature

- 1 flacon de contrôle positif : sérum ou plasma d'origine humaine inactivé contenant des

anticorps anti-HCV

- 1 flacon de contrôle négatif : sérum ou plasma d'origine humaine inactivé et dépourvu

d'anticorps anti-HCV

B) Reconstitution et stabilité

Les solutions de contrôle positif et négatif sont prêtes à l'emploi. Les dates de péremption sont indiquées sur les flacons respectifs par le fabricant. Après ouverture, elles se conservent au réfrigérateur à 2/8°C jusqu'à la date de péremption indiquée également par le fabicant.

C) Utilisation

Le calibrage est obligatoire pour chaque série d'analyse, donc pour chaque microplaque.

On détermine une valeur seuil à l'issue d'un calcul mathématique imposé par le fabricant du coffret réactif. La valeur moyenne des DO des contrôles négatifs et positifs est utilisée dans ce calcul.

III - Contrôles de qualité interne

La plaque est validée en fonction de la valeur seuil calculée et en fonction des valeurs d'absorbance des contrôles positifs et négatifs. Ces valeurs observées doivent être comprises dans les zones de fluctuation indiquées par le fabricant.

Il convient de s'assurer des écarts admissibles des DO des contrôles négatifs et positifs puis calculer la valeur seuil.

IV - Protocole opératoire

Se reporter aux 3 fiches annexées à cette procédure :

- IMx HCV : test sérologique de dépistage des anticorps HCV

- MONOLISA^R anti-HCV : test sérologique de dépistage des anticorps HCV

- INO-LIA HCV AbIII : test sérologique de validation