Fiche annexe N° 3

Nomenclature :

Chapitre N° :

Analyse N° :

Coefficient :

A) Méthode d'analyse

Qualification

L'Agence du Médicament, founit la liste des tests de validation du dépistage des anticorps anti-HCV dûment autorisés. Il est impératif de se conformer aux instructions officielles, notamment en cas de rappel d'une trousse de réactifs.

1) Description et principe

Test "immunoblot" qualitatif dans lequel les antigènes recombinants et peptides de synthèse correspondants aux produits codés par le génome HCV sont fixés en bandes individuelles sur bandelette nylon et support plastique.

Suivre le protocole opératoire décrit sur la notice jointe au coffret de réactif

2) Obligations techniques prévues dans les arrêtés fixant la nomenclature des actes de biologie médicale

Tout échantillon révélé positif par l'une au l'autre ou les deux méthodes ELISA de dépistage doit être confirmé par une technique de validation, autorisée par l'Agence du Médicament.

3) Méthode de référence

Absence ; il existe en revanche un panel de sérums de référence.

4) Documentation relative à l'analyse

Une notice est disponible dans chaque coffret de réactif et contient le protocole opératoire propre à la technique.

B) Réactifs utilisés

- Trousse INNO-LIA HCV Ab III. Innogénétic 20 tests unitaires.

- N° d'enregistrement à l'agence du médicament :

- Les réactifs sont stockés dans le réfrigérateur de la paillasse. La péremption est indiquée par le

fabricant.

- Noter la date d'ouverture au marqueur sur le coffret.

- L'agitation des réactifs concentrés est très importante, de même que celle des dilutions

extemporanées (Vortex).

C) Consommables

- Embouts de pipettes

- Gants jetables

- Accuvettes

D) Résultats

Validation de chaque bandelette

Vérifier la validité du test en observant les bandes obtenues pour les échantillons de contrôle négatif et positif en les comparant aux 3 bandes disposées sur la bandelette afin d'estimer l'intensité de coloration des bandes. (estimation +/-, 1+, 3+)

Le test est validé si :

- La bandelette du contrôle positif présente une réactivité vis à vis de toutes les bandes

antigéniques dont l'intensité est au moins égale à 1+, sauf pour la bande E2/NS1 pouvant

présenter une réactivité moindre (+/-)

- La bandelette du contrôle négatif ne présente pas de réactivité sur l'ensemble des bandes

antigéniques ou au plus une réactivité d'intensité inférieure au témoin +/-

- Les bandes de contrôle d'intensité 1+ et 3+ sont présentes sur chaque bandelette

- L'intensité de la bande de contrôle 3+ est supérieure à celle de la bande de contrôle 1+

- La bande de contrôle streptavidine est invisible sur l'ensemble des bandelettes

1) Validation analytique : Interprétation des résultats :

Identité et localisation des antigènes et des contrôles sur la bandelette :

- De gauche à droite à partir de l'extrémité plastifiée de la bandelette (où est inscrit le nom du

patient), les bandes antigéniques et de contrôles se succèdent ainsi :

. Contrôle Steptavidine . Contrôle 3+ . Contrôle 1+ . Contrôle +/-

. Antigène C1+2 . Antigène C3+4 . Antigène E2/NS1

. Antigène NS3 . Antigène NS4 . Antigène NS5

- Les 3 bandes de contrôle d'intensité sont utilisées pour définir la réactivité de chaque bande

antigénique

- Si "R" est la réactivité, interpréter les résultats comme suit :

. R< témoin +/- : bande - . témoin +/- < R < 1+ : bande +/-

. R = 1+ : bande 1+

. 1+ < R < 3+ : bande 2+ . R = 3+ : bande 3+ . R > 3+ : bande 4+

2) Expression des résultats :

Le test de validation est :

- Négatif , c'est à dire qu'on conclue à une sérologie Hépatite C négative quand toutes les bandes

antigèniques sont invisibles.

- Positif , et donc confirme la présence d'anticorps anti-HCV lorsque :

. 1 bande antigénique présente une réactivité d'intensité au moins égale à 2+

. ou quand 2 bandes antigéniques au minimum présentent une réactivité d'intensité

au moins égale à 1+

- Indéterminé quand :

. une seule bande présente une réactivité égale à 1+

. ou une ou plusieurs bandes présentent une réactivité dont l'intensité est +/-

4) Saisie des résultats sur l'informatique GESPOWER

Saisir l'interprétation de chaque bande antigénique en précisant son intensité de coloration.

5) Archivage

Les résultats sont conservés à la paillasse dans le classeur "validation HEPATITE C" situé dans l'armoire métallique de la sérologie.